北京协和医院
三级甲等综合医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承
1增菌
称取检样25g,加入装有225mL碱性蛋白胨水(APW)的广口瓶内。固体样品应以均质器9000r/min-10000r/min打碎,或以剪刀充分剪碎。(36±1)℃培养6h-8h和16h-24h。
如为牡蛎样品,应同样制备另一份检样,置于APW中,42℃培养6h-8h和16h-24h。
2分离
以3mm-5mm接种环取6h-8h和16h-24h增菌培养液的表面生长物一环分别划线家终于TCBS琼脂平板至少各一个,于(36±1)℃培养18-24h。
在TCBS琼脂上,典型的霍乱弧菌菌落为大的,光滑,黄色,稍平,具有不透明中心和半透明的边缘。
3初步鉴定
(1)用接种环挑取TCBS琼脂平板上2-5个可疑菌落,划线于T1N1琼脂平板上,(36±1)℃培养12h-18h。
(2)以无菌白色滤纸沾取T1N1琼脂表面培养物,滴加氧化酶试剂进行氧化酶试验。
(3)以无菌环取氧化酶阳性的培养物于0.5%去氧胆酸钠液试剂滴中,进行粘丝试验。
(4)以接种针取氧化酶和粘丝试验阳性的培养物,接种TSI、KIA和AGS,穿刺底层并划线斜面。
(5)以接种针取上项相同培养物接种T1N0和T1N3肉汤。
(6)将TSI、KIA、AGS、T1N0和T1N3肉汤于(36±1)℃培养18h-24h。
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