北京协和医院
三级甲等综合医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承
取材:血液
腺病毒抗体的测定原理:免疫荧光法:荧光色素具有能和抗体蛋白分子结合并保持抗体活性的特性,即抗原抗体结合成免疫复合物的特性,通过观察荧光色素而检测相应的腺病毒组特异性抗原。
试剂:
(1)pH7.4的PBS液。
(2)荧光抗体。
操作方法:
(1)直接法:荧光标记抗体直接与病毒抗原反应。此方法简便、快速、特异性高,但敏感性差。
①固定:将病毒抗原滴玻片上,冷丙酮中固定10min,并作阳性和阴性对照。
②洗涤:pH7.4的PBS液洗涤3次。
③染色:滴加相应的荧光抗体,置于湿盒中37℃,作用30min。
④洗涤:pH7.4PBS液洗涤3次。
⑤晾干:封片观察。封片用80%的甘油和10%0.01mol/LpH7.4的PBS液。
(2)间接法:病毒抗原先与第一抗体结合(病人恢复期血清或病毒免疫动物血清)再与第二抗体(荧光抗体)反应。该法敏感性强。
①固定:待检病毒抗原标本按一定稀释度滴于玻片上,同时作阳性和阴性对照,冷丙酮中固定10min。
②洗涤:pH7.4PBS液洗3次。
③加入一定稀释度的第一抗体,湿盒中37℃作用30min。
④洗涤:pH7.4PBS液洗3次。
⑤加第二抗体(荧光抗体),湿盒中37℃作用30min。
⑥洗涤:pH7.4PBS液洗3次。
⑦晾干、封片、观察。
(3)结果判定:荧光显微镜镜检,根据特异性的荧光强度判定结果,用加减号表示:
(-):无荧光。
(±):极弱的可疑荧光。
(+):荧光较弱,但清晰可见。
(++):荧光明亮。
(+++~++++):荧光闪亮,且范围广泛。
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