北京协和医院
三级甲等综合医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承
取材:血液
乙型肝炎e抗体的测定原理:采用单克隆抗-HBe包被反应板,加入待查标本,同时加入基因工程重组HBeAg和多克隆抗-HBe-HRP,形成竞争结合,如待测标本中抗-HBe含量高,则抗-Hbe-HRP与HbeAg结合后形成游离物被洗涤掉,加入TMB底物时显色淡,反之显色深。
试剂:包被抗-HBs反应板及HRP-抗-HBs,阴、阳性对照血清,洗涤液、底物液等。
操作方法:
(l)实验准备从冷藏环境中取出试剂盒,在室温下平衡30min,同时将浓缩洗涤液作1∶20稀释。
(2)加待测标本加入待测标本每孔0.05ml,并设阳性对照2孔,阴性对照2孔空白对照1孔。
(3)加中和试剂每孔0.05ml,空白对照孔不加。
(4)加酶结合物每孔0.05ml,空白对照孔不加,充分混匀,置37℃孵育30min。
(5)洗板机洗板选择洗涤程序5次洗板,最后拍干。
(6)加显色剂先加显色剂A,每孔0.05ml;再加显色剂B,每0.05ml;充分混匀,放置37℃避光孵育15min。
(7)终止反应每孔加终止液0.05ml,混匀。
(8)测定用酶标仪读数,可选择单波长450nm(以空白孔校零)
或双波长450/630,读取各孔OD值。
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