北京协和医院
三级甲等综合医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承
取材:血液
乙型肝炎e抗原的测定原理:本试验是在预包被抗-HBe的微孔板上进行的二阶段反应。在第一阶段,将酶标抗体加入试验微孔中,并孵育一定时间。如标本中存在表面抗原便会与包被在微孔表面的抗体结合,同时与酶标抗体结合形成包被抗-HBe-HBeAg-酶标抗体固化复合物。假如标本中没有HBeAg则无法形成这种复合物,未结合的血清或血浆蛋白将在洗涤过程中被洗去。在第二阶段,加入TMP,如微孔中存在固化的复合物,则OPD被氧化形成有色的终产物,加入硫酸后这种反应将终止。
试剂:国内有商品化试剂盒供应,内含抗HBe包被反应板(条),抗HBe-HRP应用液,HBeAg试剂(中和试剂)以及阴、阳性对照血清,抗HBe阴、阳性对照血清,洗涤液,底物液及终止液等试剂。
操作方法:按试剂盒使用说明书进行操作。
(1)两步法操作:
①加样品:检测HBeAg时,在包被反应板(条)各孔内加入样品100μl,每次试验有阴、阳性对照,37℃保温2h,洗板4次。检测抗HBe时,各孔加入中和试剂50μl及样品50μl,每次试验有阴、阳性对照,37℃保温2h,洗板4次。
②加抗HBe-HRP:各孔加入抗HBe酶结合物100μl,37℃保温2h,洗板4次。
③显色:各孔加入底物液100μl,37℃保温15min后加终止液1mol/L硫酸50μl。
④结果判读:A.目测法:检测HBeAg时,无色为阴性,淡黄色至橘色为阳性。检测HBe时,橘红色为阴性,无色及淡黄色为阳性。B.比色法:在酶标仪上,以试剂空白校零点,测各孔在492nm光密度值。
(2)一步法操作:
①加样品:同时加中和试剂及抗HBe-HRP。A.检测HBeAg:在包被反应板(条)各孔内加入样品50μl及抗HBe-HRP100μl,混匀后37℃保温1h,洗板4次。B.检测抗HBe:各孔内加入样品50μl,中和试剂及抗HBe-HRP各50μl,混匀后37℃保温1h,洗板4次。
②显色和判读结果:同两步法。
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